| 一、原理 本试剂盒采用直接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物恩诺沙星和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗恩诺沙星酶标抗体，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物恩诺沙星的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物恩诺沙星的含量。 二 、试剂盒技术指标 试剂盒灵敏度：0.1 ppb 检测下限 组织样本（鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼） 1 ppb 血清样本 1 ppb 蜂蜜样本 2 ppb 交叉反应率 恩诺沙星 100% 环丙沙星 1.25% 诺氟沙星 1.65% 其它沙星类药物交叉反应率均小于0.1% 样本回收率 组织样本（鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼） 100±20% 血清样本 100±20% 蜂蜜样本 90±15% 三、试 剂 盒 组 成 1．微量测试孔： 96孔，12条 2．标 准 液×6瓶： （1mL/瓶） 0 ppb、 0.1 ppb、0.3 ppb、 0.9 ppb、 2.7 ppb、 8.1 ppb 3．酶标记物 7 mL 4．底物缓冲液 7 mL 5．底物液 7 mL 6．终止液 7 mL 7．20倍浓缩洗涤液 50 mL 加蒸馏水后稀释到1000 mL。 9．复溶液 50 mL 四、样本前处理步骤 样本处理前须知： 1．实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。 2．实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。 1. 动物组织样本（鸡肉，鱼肉，虾肉，猪肉）） 1．鱼虾去皮取肉，用匀浆器均质样品； 2．称1.0 g 均质过的组织样本于50 mL离心管中； 3．加入含5%甲醇的复溶液2 ml，震荡10 min； 4．5000 r/min以上离心10 min（如果上清液太浑浊需取出 2-4mL再次离心）； 5．取上清液，用复溶液稀释5倍。震荡均匀。 6．取50 µL用于分析。 样本稀释倍数：15 2 液态奶 称取样品5 mL，于10000 r/min离心10 min。拨去上层油脂，取上清液，用复溶液稀释15倍。 震荡均匀。取50 uL待测。 稀释倍数15倍。 3 酸奶 称取样品5 g，于10000 r/min离心1 0min。取上清，用复溶液稀释15倍。加入等量正己烷，轻轻混匀。5000 r/min离心10 min。去除上层正己烷，取下层清液50 uL待测。 稀释倍数15倍。 4 肝脏 用匀浆器均质样品，称取样品1 g，加入复溶液3 mL，震荡10 min。沸水浴10 min。5000 r/min离心10 min。取上清，用复溶液稀释5倍。震荡均匀。取50 uL待测。 稀释倍数20倍。 5. 蜂蜜 1．取1 g蜂蜜，加入2 mL 0.02 M PB缓冲液，振荡至蜂蜜全部溶解； 2．加入8 mL二氯甲烷，振荡5 min，4000 r/min以上离心5 min； 3．轻吸掉上层，取下层有机相至干燥溶器中，50 ℃氮气吹干/旋转蒸发至干； 4． 用1 mL复溶液溶解干燥的残留物，再用复溶液将其按1：3稀释； 5．取50 µL用于分析。 样本稀释倍数：4 五、操作步骤： 1．将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温平衡30 min以上, 注意 每种液体试剂使用前均须摇匀。 2．按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。 3．加标准品/样本50 µL /孔，然后加入酶标液50 µL /孔，再振荡混匀，用盖板膜盖板，37℃环境反应30 min（室温下反应40 min）。 4．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。 5．显色：每孔加入底物缓冲液50 µL，再加底物液50 µL，轻轻振荡混匀，室温或37℃环境避光显色10 min。 6．测定：每孔加入终止液50 µL，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450 nm处（在20min内读完数据），测定吸光度值。 六、结果判定 以标准品百分吸光率为纵坐标，以恩诺沙星标准品浓度（ng/mL）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中恩诺沙星的实际浓度。 七、注意事项 1．终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。 2．不要使用已过有效日期的检测试剂盒；不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用，以免降低灵敏度。 3．0标准液的OD值小于0.6时，表示试剂可能变质，请勿使用。 4. 显色剂变蓝，表明已变质，请勿使用。 八、储藏条件和保质期 储藏条件：试剂盒于2-8 ℃ 保存，不要冷冻。 保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。 | 
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