人肿瘤标志物(CA724)Elisa试剂盒
Human CA724 ELISA Kit
货号:KB1338A
包装:96T/48T 检测标本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。 保存:2-8℃,6个月。
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人肿瘤标志物(CA724)Elisa试剂盒供应商:
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建议使用的实验方案 标准品浓度(mIU/ml) A 40 40 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 B 20 20 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 C 10 10 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 D 5.0 5.0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 E 2.5 2.5 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 F 1.25 1.25 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 操作步骤 1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。 2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。 3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。 4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。 5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。 6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。 7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。 8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。 9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制 96/48人份酶标板 1块板(96T) 半块板(48T) 即用型 塑料膜板盖 1块 半块 即用型 标准品:800pg/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按说明书进行稀稀 空白对照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型 标准品稀释缓冲液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型 生物素标记的抗IFN-γ抗体 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型 洗涤缓冲液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按说明书进行稀释 底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 终止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 标本稀释液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型 操作步骤 1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。 2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。 3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。 4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。 5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。 6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。 7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。 8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。 9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。 操作注意事项 1. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。 2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。 3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。 5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8. 加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
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