人垂草扁桃酸(VMA) Elisa试剂盒
Human vanillylmandelic acid,VMA ELISA Kit
货号:KB1345A
包装:96T/48T 检测标本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。 保存:2-8℃,6个月。
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人垂草扁桃酸(VMA) Elisa试剂盒供应商:
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试剂的准备 1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行: 800 pg/ml (6号标准品) 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 400 pg/ml (5号标准品) 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 200 pg/ml (4号标准品) 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 100 pg/ml (3号标准品) 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 50 pg/ml (2号标准品) 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 25 pg/ml (1号标准品) 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 0 pg/ml (空白对照) 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
细胞培养上清: 检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀 释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 组织标本: 切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS ,缓冲液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制剂或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀 浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 血浆: 应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入 10 %( v/v )抗凝剂 ( 0.1M 柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。如有沉淀形 成,应再次离心。 尿液、胸腹水、脑脊液: 用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。 细胞培养上清: 检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀 释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 组织标本: 切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS ,缓冲液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制剂或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀 浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 操作步骤 1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。 2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。 3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。 4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。 5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。 6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。 7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。 8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。 9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
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