人15脂加氧酶(15-LO/LOX)Elisa试剂盒
Human 15-lipoxygenase,15-LO/LOX ELISA Kit
货号:KB1900A
包装:96T/48T 检测标本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。 保存:2-8℃,6个月。
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人15脂加氧酶(15-LO/LOX)Elisa试剂盒供应商:
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细胞培养上清: 检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀 释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 组织标本: 切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS ,缓冲液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制剂或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀 浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 操作注意事项 1. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。 2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。 3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。 5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8. 加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、 组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液 5、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂盒内容及其配制 试剂盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制 96/48人份酶标板 1块板(96T) 半块板(48T) 即用型 塑料膜板盖 1块 半块 即用型 标准品:800pg/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按说明书进行稀稀 空白对照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型 标准品稀释缓冲液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型 生物素标记的抗IFN-γ抗体 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型 洗涤缓冲液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按说明书进行稀释 底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 终止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 标本稀释液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型 细胞培养上清: 检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀 释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 组织标本: 切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS ,缓冲液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制剂或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀 浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
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